Nature.com сайтад зочилсонд баярлалаа. Таны ашиглаж буй хөтчийн хувилбар нь CSS дэмжлэг хязгаарлагдмал байна. Хамгийн сайн үр дүнд хүрэхийн тулд бид шинэ хөтөч ашиглахыг зөвлөж байна (эсвэл Internet Explorer дээр нийцтэй байдлын горимыг идэвхгүй болгох). Энэ хооронд бид үргэлжлүүлэн дэмжлэг үзүүлэхийн тулд сайтыг хэв маяг болон JavaScriptгүйгээр харуулах болно.
Модик өөрчлөлтийн (MC) амьтны загварыг бий болгох нь MC-г судлах чухал үндэс суурь болдог. Шинэ Зеландын цагаан туулайны тавин дөрвөн туулайг хуурамч мэс заслын бүлэг, булчингийн суулгацын бүлэг (ME бүлэг) болон цөмийн пульпосус суулгацын бүлэг (NPE бүлэг) гэж хуваасан. NPE бүлэгт нурууны завсрын дискийг урд талын нурууны мэс заслын аргаар ил гаргаж, зүү ашиглан L5 нугаламын биеийг төгсгөлийн хавтангийн ойролцоо хатгасан. NP-г L1/2 нугаламын завсрын дискнээс тариураар гаргаж аваад түүнд тарьсан. Дэд хондраль ясанд нүх өрөмдсөн. Булчингийн суулгацын бүлэг болон хуурамч мэс заслын бүлгийн мэс заслын процедур, өрөмдлөгийн аргууд нь NP суулгацын бүлгийнхтэй ижил байв. ME бүлэгт булчингийн хэсгийг нүхэнд хийсэн бол хуурамч мэс заслын бүлэгт нүхэнд юу ч оруулаагүй. Мэс заслын дараа MRI сканнердах, молекул биологийн шинжилгээ хийсэн. NPE бүлгийн дохио өөрчлөгдсөн боловч хуурамч мэс заслын бүлэг болон ME бүлэгт дохионы илэрхий өөрчлөлт гараагүй. Гистологийн ажиглалтаар суулгацын хэсэгт эдийн хэвийн бус үржил ажиглагдсан бөгөөд NPE бүлэгт IL-4, IL-17 болон IFN-γ-ийн илэрхийлэл нэмэгдсэн байна. NP-ийг ясны дэд хэсэгт суулгаснаар MC-ийн амьтны загварыг бүрдүүлж болно.
Модик өөрчлөлт (MC) нь соронзон резонансын дүрслэл (MRI) дээр харагдах нугаламын төгсгөлийн хавтангууд болон зэргэлдээх чөмөгний гэмтэл юм. Эдгээр нь холбогдох шинж тэмдэгтэй хүмүүст нэлээд түгээмэл тохиолддог1. Олон судалгаагаар нурууны өвдөлт (LBP)-тэй холбоотой тул MC-ийн ач холбогдлыг онцолсон2,3. де Роос нар4 болон Модик нар5 анх нугаламын чөмөгний гурван өөр төрлийн субхондрал дохионы гажигийг бие даан тодорхойлсон. Модик I хэлбэрийн өөрчлөлт нь T1-жинлэсэн (T1W) дарааллын гипопоинтенз ба T2-жинлэсэн (T2W) дарааллын гиперинтенз юм. Энэ гэмтэл нь ясны чөмөгний ан цавын төгсгөлийн хавтангууд болон зэргэлдээх судасны мөхлөгт эдийг илрүүлдэг. Модик II хэлбэрийн өөрчлөлт нь T1W болон T2W дарааллын аль алинд нь өндөр дохиог харуулдаг. Энэ төрлийн гэмтэлд төгсгөлийн хавтангийн устгал, түүнчлэн зэргэлдээх ясны чөмөгний гистологийн өөхний орлуулалт илэрч болно. Модик III хэлбэрийн өөрчлөлт нь T1W болон T2W дарааллын бага дохиог харуулдаг. Төгсгөлийн хавтангуудтай харгалзах склерозын гэмтэл ажиглагдсан6. МК нь нурууны эмгэг судлалын өвчин гэж тооцогддог бөгөөд нурууны олон дегенератив өвчинтэй нягт холбоотой байдаг7,8,9.
Боломжтой өгөгдлийг харгалзан үзвэл хэд хэдэн судалгаагаар MC-ийн шалтгаан, эмгэг жамын механизмын талаар нарийвчилсан ойлголтыг өгсөн. Альберт нар MC нь дискний ивэрхийллээс үүдэлтэй байж болзошгүй гэж үзсэн8. Ху нар MC-ийг дискний хүнд хэлбэрийн доройтолтой холбон тайлбарласан10. Крок "дотоод дискний урагдал" гэсэн ойлголтыг дэвшүүлсэн бөгөөд энэ нь давтагдсан дискний гэмтэл нь төгсгөлийн хавтан дээр бичил урагдал үүсгэж болзошгүй гэж үздэг. Хагарал үүссэний дараа цөм пульпосус (NP)-ээр төгсгөлийн хавтанг устгах нь аутоиммун хариу урвалыг өдөөж, улмаар MC11 үүсэхэд хүргэдэг. Ма нар үүнтэй төстэй үзэл бодлыг хуваалцаж, NP-ээр өдөөгдсөн аутоиммун чанар нь MC12-ийн эмгэг жамд гол үүрэг гүйцэтгэдэг гэж мэдээлсэн.
Дархлааны системийн эсүүд, ялангуяа CD4+ Т туслагч лимфоцитууд нь аутоиммун өвчний эмгэг жамд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг13. Саяхан нээгдсэн Th17 дэд бүлэг нь үрэвслийн эсрэг цитокин IL-17-г үүсгэдэг, химокин экспрессийг дэмждэг, гэмтсэн эрхтний Т эсийг IFN-γ14 үүсгэхэд өдөөдөг. Th2 эсүүд нь дархлааны хариу урвалын эмгэг жамд өвөрмөц үүрэг гүйцэтгэдэг. IL-4-ийг төлөөлөх Th2 эсийн хувьд экспресс хийх нь дархлааны эмгэг судлалын ноцтой үр дагаварт хүргэж болзошгүй15.
Хэдийгээр MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 дээр олон клиник судалгаа хийгдсэн боловч хүмүүст байнга тохиолддог MC процессыг дуурайж, шалтгааныг нь судлах эсвэл зорилтот эмчилгээ гэх мэт шинэ эмчилгээг хийхэд ашиглаж болох тохиромжтой амьтны туршилтын загварууд хомс хэвээр байна. Өнөөдрийг хүртэл MC-ийн цөөн хэдэн амьтны загвар нь үндсэн эмгэг судлалын механизмыг судалсан гэж мэдээлсэн.
Альберт, Ма нарын санал болгосон аутоиммун онол дээр үндэслэн энэхүү судалгаагаар өрөмдсөн нугаламын төгсгөлийн хавтангийн ойролцоо NP-г автоматаар шилжүүлэн суулгах замаар энгийн бөгөөд давтагдах боломжтой туулайн MC загварыг бий болгосон. Бусад зорилго нь амьтны загваруудын гистологийн шинж чанарыг ажиглах, MC-ийн хөгжилд NP-ийн тодорхой механизмыг үнэлэх явдал юм. Үүний тулд бид MC-ийн явцыг судлахын тулд молекул биологи, MRI, гистологийн судалгаа зэрэг аргуудыг ашигладаг.
Мэс заслын үеэр хоёр туулай цус алдаж, MRI шинжилгээний үеэр мэдээгүйжүүлгийн үеэр дөрвөн туулай нас баржээ. Үлдсэн 48 туулай амьд үлдэж, мэс заслын дараа зан үйлийн болон мэдрэлийн шинж тэмдэг илрээгүй.
MRI нь өөр өөр нүхэнд суулгагдсан эдийн дохионы эрчим өөр өөр байгааг харуулж байна. NPE бүлгийн L5 нугаламын биеийн дохионы эрчим нь суулгаснаас хойш 12, 16, 20 долоо хоногт аажмаар өөрчлөгдсөн (T1W дараалал нь бага дохиог харуулсан, T2W дараалал нь холимог дохио болон бага дохиог харуулсан) (Зураг 1C), харин суулгагдсан хэсгүүдийн бусад хоёр бүлгийн MRI харагдах байдал ижил хугацаанд харьцангуй тогтвортой хэвээр байв (Зураг 1A, B).
(A) Туулайн нурууны нурууны 3 цагийн цэг дэх төлөөллийн дараалсан MRI. Хуурамч мэс заслын бүлгийн зургуудад дохионы гажиг илрээгүй. (B) ME бүлгийн нугаламын биеийн дохионы шинж чанар нь хуурамч мэс заслын бүлгийнхтэй төстэй бөгөөд цаг хугацааны явцад суулгацын хэсэгт мэдэгдэхүйц дохионы өөрчлөлт ажиглагдаагүй. (C) NPE бүлэгт бага дохио нь T1W дараалалд тодорхой харагдаж байгаа бөгөөд холимог дохио болон бага дохио нь T2W дараалалд тодорхой харагдаж байна. 12 долоо хоногийн үеэс 20 долоо хоногийн хугацаа хүртэл T2W дарааллын бага дохиог тойрсон үе үе гарч ирдэг өндөр дохионууд буурдаг.
NPE бүлгийн нугаламын биеийн суулгацын хэсэгт ясны илэрхий гиперплази ажиглагдаж болох бөгөөд ясны гиперплази нь NPE бүлэгтэй харьцуулахад 12-20 долоо хоногийн хооронд илүү хурдан тохиолддог (Зураг 2C), загварчилсан нугаламын биед мэдэгдэхүйц өөрчлөлт ажиглагдаагүй; Шам бүлэг ба ME бүлэг (Зураг 2C) 2A, B).
(A) Суулгасан хэсгийн нугаламын биеийн гадаргуу маш гөлгөр, нүх нь сайн эдгэрдэг бөгөөд нугаламын биед гиперплази байхгүй. (B) ME бүлгийн суулгасан хэсгийн хэлбэр нь хуурамч мэс заслын бүлгийнхтэй төстэй бөгөөд цаг хугацааны явцад суулгасан хэсгийн гадаад төрх байдалд мэдэгдэхүйц өөрчлөлт гараагүй. (C) NPE бүлгийн суулгасан хэсэгт ясны гиперплази үүссэн. Ясны гиперплази хурдан нэмэгдэж, тэр ч байтугай нугаламын завсрын дискээр дамжин эсрэг талын нугаламын бие хүртэл тархсан.
Гистологийн шинжилгээ нь ясны үүслийн талаар илүү дэлгэрэнгүй мэдээлэл өгдөг. Зураг 3-т H&E-ээр будсан мэс заслын дараах хэсгүүдийн зургийг харуулав. Хуурамч мэс заслын бүлэгт хондроцитууд сайн байрласан бөгөөд эсийн үржил илрээгүй (Зураг 3A). ME бүлгийн нөхцөл байдал хуурамч мэс заслын бүлгийнхтэй төстэй байсан (Зураг 3B). Гэсэн хэдий ч NPE бүлэгт суулгацын хэсэгт олон тооны хондроцит болон NP төст эсийн үржил ажиглагдсан (Зураг 3C);
(A) Төгсгөлийн хавтангийн ойролцоо трабекула харагдаж, хондроцитууд нь эсийн хэмжээ, хэлбэртэй жигд, нямбай байрладаг бөгөөд үржил шимгүй (40 дахин). (B) ME бүлгийн суулгацын талбайн байдал нь хуурамч бүлгийнхтэй төстэй. Трабекула ба хондроцитууд харагдаж болох ч суулгацын талбайд илэрхий үржил байхгүй (40 удаа). (B) Хондроцит ба NP төст эсүүд мэдэгдэхүйц үржиж, хондроцитын хэлбэр, хэмжээ жигд бус (40 дахин) байгааг харж болно.
Интерлейкин 4 (IL-4) мРНХ, интерлейкин 17 (IL-17) мРНХ, интерферон γ (IFN-γ) мРНХ-ийн экспрессийг NPE болон ME бүлгүүдэд ажигласан. Зорилтот генийн экспрессийн түвшинг харьцуулж үзэхэд IL-4, IL-17, IFN-γ-ийн генийн экспрессийг NPE бүлэгт ME бүлэг болон хуурамч мэс заслын бүлгийнхтэй харьцуулахад мэдэгдэхүйц нэмэгдсэн (Зураг 4) (P < 0.05). Хуурамч мэс заслын бүлэгтэй харьцуулахад ME бүлгийн IL-4, IL-17, IFN-γ-ийн экспрессийн түвшин бага зэрэг нэмэгдэж, статистикийн өөрчлөлтөд хүрээгүй (P > 0.05).
NPE бүлэгт IL-4, IL-17 болон IFN-γ-ийн mRNA экспресс нь хуурамч мэс заслын бүлэг болон ME бүлгийнхээс хамаагүй өндөр хандлагатай байсан (P < 0.05).
Үүний эсрэгээр, ME бүлгийн илэрхийллийн түвшин мэдэгдэхүйц ялгаагүй (P>0.05).
Өөрчлөгдсөн мРНХ-ийн экспрессийн хэв маягийг баталгаажуулахын тулд IL-4 болон IL-17-ийн эсрэг худалдаанд байгаа эсрэгбие ашиглан Вестерн блот шинжилгээг хийсэн. Зураг 5A, B-д үзүүлсэнчлэн, ME бүлэг болон хуурамч мэс заслын бүлэгтэй харьцуулахад NPE бүлгийн IL-4 болон IL-17-ийн уургийн түвшин мэдэгдэхүйц нэмэгдсэн (P < 0.05). Хуурамч мэс заслын бүлэгтэй харьцуулахад ME бүлгийн IL-4 болон IL-17-ийн уургийн түвшин статистикийн хувьд мэдэгдэхүйц өөрчлөлтөд хүрээгүй (P> 0.05).
(A) NPE бүлгийн IL-4 ба IL-17 уургийн түвшин ME бүлэг болон плацебо бүлгийнхээс мэдэгдэхүйц өндөр байсан (P < 0.05). (B) Вестерн блот гистограмм.
Мэс заслын үеэр хүний дээжийн тоо хязгаарлагдмал тул MC-ийн эмгэг жамын талаар тодорхой, нарийвчилсан судалгаа хийхэд нэлээд хүндрэлтэй байна. Бид MC-ийн болзошгүй эмгэг жамын механизмыг судлахын тулд амьтны загварыг бий болгохыг оролдсон. Үүний зэрэгцээ, NP автотрансплантацийн улмаас үүссэн MC-ийн явцыг хянахын тулд рентген шинжилгээ, гистологийн үнэлгээ, молекул биологийн үнэлгээг ашигласан. Үүний үр дүнд NP суулгацын загвар нь дохионы эрчим 12 долоо хоногоос 20 долоо хоног хүртэл аажмаар өөрчлөгдсөн (T1W дарааллын бага дохио ба T2W дарааллын бага дохио холилдсон), энэ нь эдийн өөрчлөлтийг илтгэж, гистологи ба молекул биологийн үнэлгээ нь рентген шинжилгээний үр дүнг баталгаажуулсан.
Энэхүү туршилтын үр дүнгээс харахад NPE бүлэгт нугаламын биеийн зөрчлийн хэсэгт харааны болон гистологийн өөрчлөлтүүд гарсан байна. Үүний зэрэгцээ IL-4, IL-17 болон IFN-γ генүүд, мөн IL-4, IL-17 болон IFN-γ-ийн илэрхийлэл ажиглагдсан нь нугаламын биед аутологийн цөмийн цөмийн эдийн зөрчил нь цуврал дохио болон морфологийн өөрчлөлтийг үүсгэж болзошгүйг харуулж байна. Амьтны загварын нугаламын биетүүдийн дохионы шинж чанарууд (T1W дарааллын бага дохио, T2W дарааллын холимог дохио болон бага дохио) нь хүний нугаламын эсүүдийн дохионы шинж чанаруудтай маш төстэй бөгөөд MRI шинж чанарууд нь гистологи болон нийт анатомийн ажиглалтыг баталгаажуулдаг, өөрөөр хэлбэл нугаламын биеийн эсүүдийн өөрчлөлтүүд даамжирдаг. Цочмог гэмтлийн улмаас үүссэн үрэвслийн хариу урвал хатгалтын дараа удалгүй гарч болох ч MRI-ийн үр дүнгээс харахад аажмаар нэмэгдэж буй дохионы өөрчлөлтүүд хатгалтын дараа 12 долоо хоногийн дараа гарч ирсэн бөгөөд MRI өөрчлөлтүүд сэргэх эсвэл буцаагдах шинж тэмдэггүйгээр 20 долоо хоног хүртэл үргэлжилсэн байна. Эдгээр үр дүнгүүд нь аутологийн нугаламын ...
Энэхүү цоолтуурын загвар нь хангалттай ур чадвар, цаг хугацаа, мэс заслын хүчин чармайлт шаарддаг. Урьдчилсан туршилтаар нугаламын шөрмөсний бүтцийг задлах эсвэл хэт их өдөөх нь нугаламын остеофит үүсэхэд хүргэж болзошгүй юм. Зэргэлдээх дискийг гэмтээх, цочроохгүй байхыг анхаарах хэрэгтэй. Тогтвортой, давтагдах үр дүнд хүрэхийн тулд нэвтрэлтийн гүнийг хянах шаардлагатай тул бид 3 мм урт зүүний бүрхүүлийг таслах замаар гараар бөглөө хийсэн. Энэхүү бөглөөг ашиглах нь нугаламын биед жигд өрөмдлөгийн гүнийг баталгаажуулдаг. Урьдчилсан туршилтаар мэс засалд оролцсон гурван ортопедийн мэс засалч 16 калибрын зүүг 18 калибрын зүү эсвэл бусад аргуудаас илүү хялбар ажиллахыг олж мэджээ. Өрөмдлөгийн үед хэт их цус алдалтаас зайлсхийхийн тулд зүүг хэсэг хугацаанд хөдөлгөөнгүй байлгах нь илүү тохиромжтой оруулах нүхийг бий болгож, тодорхой хэмжээний MC-ийг ийм байдлаар хянах боломжтойг харуулж байна.
Хэдийгээр олон судалгаагаар MC-г онилсон боловч MC25,26,27-ийн шалтгаан, эмгэг жамын талаар бага мэдээлэлтэй байна. Өмнөх судалгаанууд дээрээ үндэслэн бид аутоиммун чанар нь MC12-ийн үүсэл, хөгжилд гол үүрэг гүйцэтгэдэг болохыг тогтоосон. Энэхүү судалгаагаар антиген өдөөлтийн дараа CD4+ эсийн ялгарах гол зам болох IL-4, IL-17, IFN-γ-ийн тоон илэрхийлэлийг судалсан. Бидний судалгаагаар сөрөг бүлэгтэй харьцуулахад NPE бүлэгт IL-4, IL-17, IFN-γ-ийн илэрхийлэл өндөр байсан бөгөөд IL-4, IL-17-ийн уургийн түвшин мөн өндөр байв.
Эмнэлзүйн хувьд дискний ивэрхийтэй өвчтөнүүдийн NP эсүүдэд IL-17 мРНХ-ийн экспресс нэмэгдсэн байна28. Эрүүл хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад цочмог шахалтгүй дискний ивэрхий загварт IL-4 болон IFN-γ экспрессийн түвшин нэмэгдсэн байна29. IL-17 нь үрэвсэл, аутоиммун өвчний үед эдийн гэмтэлд гол үүрэг гүйцэтгэдэг30 бөгөөд IFN-γ-д үзүүлэх дархлааны хариу урвалыг сайжруулдаг30. MRL/lpr хулгануудад32 болон аутоиммунд мэдрэмтгий хулгануудад IL-17-оор зуучлагдсан эдийн гэмтэл нэмэгдсэн тухай мэдээлсэн33. IL-4 нь үрэвслийн эсрэг цитокинуудын экспресс (IL-1β ба TNFα гэх мэт) болон макрофагийн идэвхжлийг дарангуйлж чаддаг34. IL-4-ийн мРНХ-ийн экспресс нь NPE бүлэгт IL-17 болон IFN-γ-тэй ижил цаг үед өөр байсан гэж мэдээлсэн; NPE бүлэгт IFN-γ-ийн мРНХ-ийн экспресс нь бусад бүлгүүдээс хамаагүй өндөр байсан. Тиймээс IFN-γ үйлдвэрлэл нь NP интеркаляциас үүдэлтэй үрэвслийн хариу урвалын зуучлагч байж болно. Судалгаагаар IFN-γ нь идэвхжүүлсэн 1-р хэлбэрийн туслагч Т эсүүд, байгалийн алуурчин эсүүд, макрофагууд35,36 зэрэг олон төрлийн эсүүдээр үүсгэгддэг бөгөөд дархлааны хариу урвалыг дэмждэг үрэвслийн гол цитокин37 болохыг харуулсан.
Энэхүү судалгаагаар аутоиммун хариу урвал нь MC-ийн үүсэл, хөгжилд оролцдог болохыг харуулж байна. Луома нар MC болон тод NP-ийн дохионы шинж чанарууд нь MRI дээр ижил төстэй бөгөөд хоёулаа T2W дараалалд өндөр дохио үзүүлдэг болохыг тогтоожээ38. IL-139 гэх мэт зарим цитокинууд MC-ийн үүсэлтэй нягт холбоотой болох нь батлагдсан. Ма нар NP-ийн дээш эсвэл доош цухуйх нь MC12-ийн үүсэл, хөгжилд ихээхэн нөлөө үзүүлдэг гэж үзсэн. Бобечко40 болон Херцбейн нар41 NP нь төрөлтөөсөө хойш судасны цусны эргэлтэд нэвтэрч чадахгүй дархлаа тэсвэрлэх чадвартай эд гэж мэдээлсэн. NP цухуйх нь гадны биетийг цусны хангамжид оруулж, улмаар орон нутгийн аутоиммун урвалыг зуучилдаг42. Аутоиммун урвал нь олон тооны дархлааны хүчин зүйлсийг өдөөж болох бөгөөд эдгээр хүчин зүйлс эдэд тасралтгүй өртөх үед дохиоллын өөрчлөлтөд хүргэж болзошгүй43. Энэхүү судалгаанд IL-4, IL-17 болон IFN-γ-ийн хэт их илэрхийлэл нь ердийн дархлааны хүчин зүйлүүд бөгөөд NP болон MC-ийн хоорондын нягт хамаарлыг цаашид нотолж байна44. Энэхүү амьтны загвар нь NP-ийн нээлт болон төгсгөлийн хавтан руу орохыг сайн дуурайдаг. Энэ үйл явц нь аутоиммунизмын MC-д үзүүлэх нөлөөг улам бүр илчилсэн.
Хүлээгдэж байсанчлан энэхүү амьтны загвар нь бидэнд MC-г судлах боломжтой платформыг олгож байна. Гэсэн хэдий ч энэ загвар нь зарим хязгаарлалттай хэвээр байна: нэгдүгээрт, амьтны ажиглалтын үе шатанд зарим завсрын шатны туулайг гистологи болон молекул биологийн шинжилгээнд зориулж эвтанази хийх шаардлагатай болдог тул зарим амьтад цаг хугацааны явцад "хэрэглээнээс гаждаг". Хоёрдугаарт, энэхүү судалгаанд гурван цагийн цэгийг тогтоосон боловч харамсалтай нь бид зөвхөн нэг төрлийн MC-г (Modic type I өөрчлөлт) загварчилсан тул хүний өвчний хөгжлийн үйл явцыг төлөөлөхөд хангалтгүй бөгөөд бүх дохионы өөрчлөлтийг илүү сайн ажиглахын тулд илүү олон цагийн цэгийг тохируулах шаардлагатай байна. Гуравдугаарт, эдийн бүтцийн өөрчлөлтийг гистологийн будгаар үнэхээр тодорхой харуулж болох боловч зарим тусгай техникүүд энэ загварт бичил бүтцийн өөрчлөлтийг илүү сайн илрүүлж чадна. Жишээлбэл, туйлширсан гэрлийн микроскопыг туулайн нугаламын дискний фибромт мөгөөрсний үүсэлтийг шинжлэхэд ашигласан45. NP-ийн MC болон төгсгөлийн хавтан дээр үзүүлэх урт хугацааны нөлөөллийг цаашид судлах шаардлагатай байна.
Шинэ Зеландын тавин дөрвөн эрэгчин цагаан туулайг (ойролцоогоор 2.5-3 кг жинтэй, 3-3.5 сартай) санамсаргүй байдлаар хуурамч мэс заслын бүлэг, булчингийн суулгацын бүлэг (ME бүлэг) болон мэдрэлийн үндэс суулгацын бүлэг (NPE бүлэг) гэж хуваасан. Бүх туршилтын журмыг Тяньжин эмнэлгийн ёс зүйн хороо баталсан бөгөөд туршилтын аргуудыг батлагдсан удирдамжийн дагуу хатуу чанд явуулсан.
S. Sobajima 46-ийн мэс заслын техникт зарим сайжруулалт хийгдсэн. Туулай бүрийг хажуу тийш хэвтүүлсэн байрлалд байрлуулж, дараалсан таван нурууны нугаламын дискний (IVD) урд гадаргууг хэвлийн арын ар талын аргаар ил гаргасан. Туулай бүрт ерөнхий мэдээ алдуулалт хийсэн (20% уретан, чихний судсаар 5 мл/кг). Хавирганы доод ирмэгээс аарцагны ирмэг хүртэл, хэвлийн паравертебраль булчин хүртэл 2 см-ийн уртын дагуу арьсны зүсэлт хийсэн. L1-ээс L6 хүртэлх баруун урд талын нурууг дээр байрлах арьсан доорх эд, хэвлийн арын эд, булчинг хурц ба мохоо аргаар ил гаргасан (Зураг 6A). Дискний түвшинг L5-L6 дискний түвшний анатомийн тэмдэглэгээ болгон аарцагны ирмэгийг ашиглан тодорхойлсон. L5 нугаламын төгсгөлийн хавтангийн ойролцоо 3 мм-ийн гүнд нүх гаргахын тулд 16 калибрын хатгалт зүү ашиглана (Зураг 6B). 5 мл-ийн тариур ашиглан L1-L2 нугаламын завсрын дискний аутологийн цөмийн цөмийг соруулж авна (Зураг 6C). Бүлэг бүрийн шаардлагын дагуу цөмийн цөм буюу булчинг авна. Өрөмдлөгийн нүхийг гүнзгийрүүлсний дараа мэс заслын үеэр нугаламын биеийн периостал эдийг гэмтээхгүй байхыг анхааран гүн фасци, өнгөц фасци болон арьсан дээр шингэдэг оёдол тавина.
(A) L5–L6 дискийг хэвлийн арын ар талын аргаар ил гаргана. (B) L5 төгсгөлийн хавтангийн ойролцоо нүх өрөмдөхийн тулд 16 калибрын зүү ашиглана. (C) Аутологийн MF-ийг хураан авна.
Чихний судсаар 20% уретан (5 мл/кг) тарьж ерөнхий мэдээгүйжүүлэг хийсэн бөгөөд мэс заслын дараа 12, 16, 20 долоо хоногт бүсэлхийн нурууны рентген зургийг давтан хийсэн.
Туулайг мэс заслаас хойш 12, 16, 20 долоо хоногийн дараа кетамин (25.0 мг/кг) болон натрийн пентобарбитал (1.2 г/кг)-ийг булчинд тарьж нядалсан. Гистологийн шинжилгээнд зориулж нурууг бүхэлд нь авч, бодит шинжилгээ хийсэн. Дархлааны хүчин зүйлсийн өөрчлөлтийг илрүүлэхийн тулд тоон урвуу транскрипц (RT-qPCR) болон вестерн блоттинг ашигласан.
MRI шинжилгээг туулайнд ортогональ мөчний ороомог хүлээн авагчаар тоноглогдсон 3.0 Т клиник соронз (GE Medical Systems, Флоренс, Өмнөд Каролина) ашиглан хийсэн. Туулайг чихний судсаар дамжуулан 20% уретан (5 мл/кг)-аар мэдээ алдуулалт хийж, дараа нь соронзон дотор нурууны хэсгийг 5 инчийн диаметртэй дугуй гадаргуугийн ороомог (GE Medical Systems) дээр төвлөрүүлж хэвтүүлэв. L3-L4-ээс L5-L6 хүртэл нурууны дискний байршлыг тодорхойлохын тулд титэм судасны T2 жинтэй байршлын зургийг (TR, 1445 мс; TE, 37 мс) авсан. Сагиттал хавтгай T2 жинтэй зүсмэлүүдийг дараах тохиргоогоор авсан: давталтын хугацаа (TR) 2200 мс ба цуурай хугацаа (TE) 70 мс бүхий хурдан эргэх-цуурай дараалал, матриц; харааны талбар 260 ба найман өдөөлт; Зүсэлтийн зузаан 2 мм, зай 0.2 мм байв.
Сүүлийн зургийг авч, сүүлчийн туулайг нядласны дараа хуурамч, булчинд суулгасан болон NP дискийг гистологийн шинжилгээнд хамруулсан. Эдийг 10% саармаг буфержуулсан формалинд 1 долоо хоногийн турш бэхлээд, этилендиаминтетрацууны хүчилээр кальцийг нь арилгаж, парафиныг зүссэн. Эдийн блокуудыг парафинд суулгаж, микротом ашиглан сагиттал хэсгүүдэд (5 мкм зузаантай) хуваасан. Зүссэн хэсгүүдийг гематоксилин ба эозин (H&E)-ээр будсан.
Бүлэг бүрийн туулайнаас нугаламын завсрын дискийг цуглуулсны дараа нийт РНХ-г үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу UNIQ-10 багана (Шанхай Сангон Биотехнологи ХХК, Хятад) болон ImProm II урвуу транскрипцийн систем (Promega Inc., Мэдисон, Висконсин, АНУ) ашиглан гаргаж авсан. Урвуу транскрипцийг гүйцэтгэсэн.
RT-qPCR-ийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) болон SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ашиглан гүйцэтгэсэн. PCR урвалын эзэлхүүн нь 20 мкл бөгөөд 1.5 мкл шингэрүүлсэн кДНХ болон праймер тус бүрээс 0.2 мкМ агуулсан байв. Праймеруудыг OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) зохион бүтээж, Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Хятад) үйлдвэрлэсэн (Хүснэгт 1). Дараах дулааны мөчлөгийн нөхцлийг ашигласан: полимеразын идэвхжүүлэлтийн эхний алхамыг 94°C-д 2 минут, дараа нь 94°C-д загварын денатурацид зориулж тус бүр 15 секундын 40 цикл, 60°C-д 1 минут хатаах, сунгах, флуоресценц хийх. Хэмжилтийг 72°C-д 1 минутын турш гүйцэтгэсэн. Бүх дээжийг гурван удаа олшруулж, дундаж утгыг RT-qPCR шинжилгээнд ашигласан. Олшруулалтын өгөгдлийг FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) ашиглан шинжилсэн. IL-4, IL-17, болон IFN-γ генийн экспрессийг эндоген хяналт (ACTB) болгон хэвийн болгосон. Бай mRNA-ийн харьцангуй экспрессийн түвшинг 2-ΔΔCT аргыг ашиглан тооцоолсон.
Нийт уургийг RIPA лизисийн буферт (протеаза ба фосфатаза дарангуйлагч коктейль агуулсан) эдийн гомогенизатор ашиглан эдээс гаргаж авч, дараа нь эдийн үлдэгдлийг зайлуулахын тулд 4°C-д 13,000 эрг/мин хурдтайгаар 20 минутын турш центрифугээр ялгасан. Нэг замд тавин микрограмм уураг ачаалж, 10% SDS-PAGE-ээр тусгаарлаж, дараа нь PVDF мембран руу шилжүүлсэн. Блоклох ажлыг 5% өөх тосгүй хуурай сүүнд 0.1% Tween 20 агуулсан Tris-буфержуулсан давсны уусмалд (TBS) өрөөний температурт 1 цагийн турш гүйцэтгэсэн. Мембраныг туулайн декорины эсрэгбие (1:200 шингэрүүлсэн; Бостер, Ухань, Хятад) (1:200 шингэрүүлсэн; Биосс, Бээжин, Хятад)-аар 4°C-д шөнөжин инкубацлаж, хоёр дахь өдрүүдэд урвалд орсон; Хоёрдогч эсрэгбие (ямааны туулайн эсрэг иммуноглобулин G-г 1:40,000 шингэрүүлэлттэй)-тэй хамт тунхууны пероксидаза (Бостер, Ухань, Хятад)-тай хослуулан өрөөний температурт 1 цагийн турш хэрэглэнэ. Рентген туяаны дараа хемилюминесцент мембран дээрх хемилюминесценцийн өсөлтөөр барууны блотын дохиог илрүүлсэн. Денситометрийн шинжилгээнд блотыг сканнердаж, BandScan програм хангамж ашиглан тоон үзүүлэлтээр тодорхойлж, үр дүнг зорилтот генийн дархлааны хариу урвалын тубулины дархлааны хариу урвалын харьцаагаар илэрхийлсэн.
Статистикийн тооцооллыг SPSS16.0 програм хангамжийн багц (SPSS, АНУ) ашиглан хийсэн. Судалгааны явцад цуглуулсан өгөгдлийг дундаж ± стандарт хазайлт (дундаж ± SD) гэж илэрхийлж, хоёр бүлгийн хоорондох ялгааг тодорхойлохын тулд нэг талын давтагдсан хэмжүүрийн дисперсийн шинжилгээ (ANOVA) ашиглан шинжилсэн. P < 0.05 нь статистикийн хувьд ач холбогдолтой гэж үзсэн.
Тиймээс нугаламын биед аутологийн NP-г суулгаж, макроанатомийн ажиглалт, MRI шинжилгээ, гистологийн үнэлгээ, молекул биологийн шинжилгээ хийснээр MC-ийн амьтны загварыг бий болгох нь хүний MC-ийн механизмыг үнэлэх, ойлгох, шинэ эмчилгээний арга хэмжээ боловсруулах чухал хэрэгсэл болж магадгүй юм.
Энэ өгүүллийг хэрхэн иш татах вэ: Хан, К. нар. Бүсэлхий нурууны доод хэсэгт аутологийн цөм пульпосусыг суулгаснаар Модик өөрчлөлтийн амьтны загварыг бий болгосон. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., болон Boos, N. Бүсэлхий нурууны соронзон резонансын дүрслэл: шинж тэмдэггүй сайн дурынханд дискний ивэрхий ба хадгалалтын тархалт, мэдрэлийн үндэсний шахалт, төгсгөлийн хавтангийн гажиг, нүүрний үений остеоартрит. түвшин. Радиологи 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, болон Leboeuf-Eed, K. Модикийн өөрчлөлтүүд ба тэдгээрийн эмнэлзүйн олдворуудтай холбоотой байдал. Европын нурууны сэтгүүл: Европын нурууны нийгэмлэг, Европын нурууны гажигийн нийгэмлэг, Европын хүзүүний нурууны судалгааны нийгэмлэгийн албан ёсны хэвлэл 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Куйсма, М., нар. Бүсэлхий нурууны төгсгөлийн хавтангийн өөрчлөлтүүд: дунд насны эрэгтэй ажилчдын нурууны өвдөлт ба радикулиттай холбоотой тархалт ба холбоо. Нуруу 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
де Роос, А., Крессел, Х., Спритцер, К., болон Далинка, М. Бүсэлхий нурууны дегенератив өвчний үед чөмөгний төгсгөлийн хавтангийн ойролцоох өөрчлөлтийн MRI. AJR. Америкийн радиологийн сэтгүүл 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Модик, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ болон Carter, JR Дирогенийн дискний өвчин: MRI ашиглан нугаламын чөмөгний өөрчлөлтийг үнэлэх. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Модик, MT, Масарик, TJ, Росс, JS, болон Картер, JR Дистрофи дискний өвчний дүрслэл. Радиологи 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Женсен, ТС, нар. Нийт хүн амын дунд неовербертеребрал төгсгөлийн хавтангийн (Modic) дохионы өөрчлөлтийг урьдчилан таамаглагчид. Европын нурууны сэтгүүл: Европын нурууны нийгэмлэг, Европын нурууны гажигийн нийгэмлэг, Европын умайн хүзүүний нурууны судалгааны нийгэмлэгийн албан ёсны хэвлэл, 19-р хэлтэс, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Альберт, ХБ болон Манниш, К. Бүсэлхий нурууны дискний ивэрхийн дараах Модикийн өөрчлөлтүүд. Европын нурууны сэтгүүл: Европын нурууны нийгэмлэг, Европын нурууны гажигийн нийгэмлэг болон Европын умайн хүзүүний нурууны судалгааны нийгэмлэгийн албан ёсны хэвлэл 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Керттула, Л., Луома, К., Вехмас, Т., Гронблад, М., болон Каапа, Э. Модик I хэлбэрийн өөрчлөлтүүд нь дискний деформацийн доройтлыг хурдацтай даамжрахыг урьдчилан таамаглаж чадна: 1 жилийн хэтийн төлөвийн судалгаа. Европын нурууны сэтгүүл 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Ху, ЗЖ, Жао, ФД, Фан, XQ болон Фан, СВ Модик өөрчлөлтүүд: нурууны дискний доройтлын шалтгаан ба хувь нэмэр. Анагаах ухааны таамаглал 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Крок, HV Дотоод дискний урагдал. 50 жилийн хугацаанд дискний пролапсын асуудлууд. Нуруу (Фила Па 1976) 11, 650–653 (1986).
Нийтэлсэн цаг: 2024 оны 12-р сарын 13